中文简体
Anda baru sahaja menjalankan kaedah kecerunan yang berfungsi dengan sempurna minggu lepas. Piawaian penentukuran kelihatan bersih, tetapi kromatogram sampel menunjukkan puncak tambahan pada 23.8 minit. Anda menggantikan lajur, menyediakan penimbal baharu dan menyemak pengesan. Puncaknya masih ada. Kemudian anda menukar air masuk ke fasa mudah alih, dan artifak itu hilang. Itulah realiti kromatografi cecair berprestasi tinggi: ketulenan air terletak di bawah setiap pemisahan, dan apabila ia berubah, kaedahnya berubah bersamanya.
Ketulenan air mempengaruhi kualiti data HPLC dalam empat cara praktikal: kestabilan garis dasar, bentuk puncak, kebolehulangan pengekalan dan jangka hayat instrumen. Bahan cemar yang terlibat mungkin molekul organik, ion terlarut, zarah, atau mikrob. Malah sejumlah kecil satu jenis kekotoran boleh menghasilkan akibat di luar kadar kepekatannya.
Kesan Utama Ketulenan Air pada HPLC
Dalam sistem HPLC, air adalah reagen, bukan latar belakang pasif. Ia membawa penimbal, melarutkan sampel, dan menyumbang kepada latar belakang pengesan. Oleh itu, kekotoran dalam air bergerak terus ke dalam isyarat analisis. Jadual di bawah meringkaskan bahan cemar yang paling biasa dan kesannya.
| bahan cemar | Contoh atau Sumber | Kesan dalam HPLC |
|---|---|---|
| Organik terlarut | Bahan humik, pemplastis, sisa pembersih, wap pelarut | Puncak hantu yang menyerap UV, hanyut garis dasar, perubahan pengekalan |
| Ion tak organik | Natrium, klorida, silikat, logam surih | Perubahan kekonduksian, gangguan dalam kromatografi ion dan LC-MS, pelebaran puncak berkaitan logam |
| Zarah | Resin halus, habuk, mendakan | Frits yang disekat, tekanan belakang yang meningkat, haus pengedap pam, garis dasar yang bising |
| Gas terlarut | Oksigen, karbon dioksida, nitrogen | Buih dalam pengesan, pancang garis dasar, hanyut pH |
| Mikroorganisma | Bakteria dan biofilm dalam bekas simpanan | Kekotoran lajur, frits tersumbat, puncak palsu, ketidakstabilan kaedah |
Kesan ini bukan sahaja secara teori. Biofilem mikrob dalam takungan air boleh membebaskan metabolit yang menyerap UV, dan apabila filem itu terbentuk, hanya menggantikan air mungkin tidak menyelesaikan masalah sehingga takungan dibersihkan dan dibersihkan.
Apakah Maksud "HPLC-Grade" dan Air Jenis 1 Sebenarnya
Kebanyakan kaedah analisis memerlukan air yang memenuhi spesifikasi Jenis 1. Dari segi praktikal, ini bermakna kerintangan pada 25 darjah Celsius ialah kira-kira 18.2 megohm-sentimeter, kekonduksian hampir 0.055 microsiemens per sentimeter, dan jumlah karbon organik cukup rendah sehingga air tidak menghasilkan latar belakang UV atau MS yang boleh dilihat. Kerintangan sahaja tidak mencukupi. Anda juga perlu mengetahui tahap TOC, kiraan zarah, dan, dalam beberapa aplikasi, nilai silikat atau natrium.
pH air tulen bukanlah spesifikasi yang berguna. Air ultratulen hampir tidak mempunyai kapasiti penimbal, dan ia cepat menyerap karbon dioksida dari udara, jadi pH yang diukur sekitar 5.6 hanya mencerminkan CO2 terlarut. pH yang penting ialah pH fasa mudah alih penimbal yang anda sediakan.
Keperluan kualiti air juga bergantung pada pengesan. Pengesanan UV pada 210 nm amat sensitif terhadap pencemaran organik kerana banyak ikatan karbon-oksigen dan karbon-nitrogen menyerap di sana. LC-MS memerlukan air dengan kekotoran tidak meruap yang sangat rendah untuk mengelakkan penindasan ion dan pembentukan tambah. Pengesan penyejatan juga dipengaruhi oleh pencemaran tidak meruap kerana ia menaikkan isyarat latar belakang. Oleh itu, air jenis 1 adalah titik permulaan yang baik untuk hampir setiap aplikasi HPLC.
Air gred HPLC dalam botol boleh berfungsi, tetapi ia perlu disimpan dan dikendalikan dengan betul. Semak sijil analisis, rekod nombor lot, dan jangan sekali-kali menganggap bahawa bekas lama bebas daripada pertumbuhan biologi.
Elusi Kecerunan Menjadikan Kekotoran Air Kelihatan
Kekotoran air paling ketara dalam kaedah kecerunan. Dalam larian isokratik, bahan cemar yang menyerap UV mungkin hanya menaikkan sedikit garis dasar. Dalam kecerunan, pecahan air bermula tinggi dan pecahan pelarut organik meningkat dari semasa ke semasa. Bahan cemar boleh dikekalkan di bahagian kepala lajur dan kemudian dielusi apabila kandungan organik meningkat. Ini menghasilkan puncak hantu dan garis dasar hanyut yang boleh mengganggu penyepaduan dan kuantiti.
Itulah sebabnya kecerunan kosong adalah salah satu pemeriksaan paling mudah untuk kualiti air. Jalankan kecerunan tepat anda tanpa menyuntik sampel. Jika puncak muncul di tempat kosong, fasa bergerak disyaki.
Tabiat Harian Yang Melindungi Kesucian Air
Air tulen tidak kekal tulen secara tidak sengaja. Tabiat berikut menghalang masalah yang paling biasa dalam amalan HPLC.
- Gunakan air daripada sistem penulenan dengan kartrij segar, lampu UV yang berfungsi, dan sanitasi biasa.
- Kumpulkan air ke dalam bekas yang bersih dan bertutup. Jangan biarkan bekas terbuka semasa sistem berjalan.
- Jangan simpan air berhari-hari. Sediakan fasa bergerak dengan air tawar pada hari yang sama apabila boleh.
- Elakkan menambah air tawar ke dalam takungan yang terisi separa. Gantikan kandungan takungan dan bukannya menambahnya.
- Jalankan kecerunan kosong pada panjang gelombang yang digunakan untuk analisis dan rekodkan hasilnya.
- Dokumen kerintangan, TOC dan tarikh pengumpulan air dalam rekod analisis anda.
Untuk makmal yang menggunakan air botol, peraturan yang sama dikenakan. Semak tarikh luput, tutup bekas dengan segera selepas digunakan, dan jangan kembalikan air yang tidak digunakan dari bikar ke botol.
Bahan Tambahan Mengubah Masalah Air Menjadi Masalah Kaedah
Fasa mudah alih jarang mengandungi air sahaja. Garam penampan, asid, reagen pasangan ion, dan beberapa pengubah khusus ditambah pada kepekatan yang agak rendah. Jika air mengandungi kesan kekotoran yang menyerap UV, kekotoran tersebut mungkin tidak mengubah kapasiti penimbal, tetapi ia masih boleh muncul dalam isyarat pengesan.
Cecair ionik kadangkala digunakan sebagai pengubah suai fasa mudah alih untuk meningkatkan bentuk puncak atau selektiviti. Apabila anda memilih satu, standard kesucian yang sama harus digunakan. Sebagai contoh, 1-etil-3-methylimidazolium tetrafluoroborate ialah cecair ionik biasa untuk kajian kromatografi. Ia harus dilarutkan dalam air yang telah memenuhi spesifikasi Jenis 1; jika tidak, bahan tambahan menjadi satu lagi sumber pencemaran. Jika anda ingin memahami sifat berkaitan pemisahan sebatian ini, kami gambaran keseluruhan bagaimana cecair ionik berfungsi dalam proses pengasingan meliputi pembolehubah praktikal.
CAS:143314-16-3 -1 -Pembekal Cecair Etil-3-methylimidazolium Tetrafluoroborate Teknologi Ldet ialah pembekal tersuai China CAS:143314-16-3 -1 -Ethyl-3-methylimidazolium Tetrafluoroborate Cecair dan 1 -Ethyl-3-methyl... Lihat Produk → Kesucian Bermula Dengan Pembekal
Di Zhejiang Ldet, kami mengeluarkan cecair ionik dan bahan kimia khusus. Kami tahu daripada pengeluaran bahawa kesan kekotoran dalam bahan permulaan boleh mengubah prestasi hiliran. Itulah sebabnya kami memeriksa kandungan air, sisa halida dan tingkah laku UV sebelum dilepaskan. Disiplin yang sama terdapat dalam makmal HPLC: pilih bahan yang disertakan dengan spesifikasi yang didokumenkan. Sebagai contoh, 1-butil-3-methylimidazolium tetrafluoroborate tersedia dengan data ketulenan yang membolehkan anda menilai sama ada ia serasi dengan kaedah pengesanan anda.
CAS: 174501-65-6-1-Butyl-3-methylimidazolium tetrafluoroborate Pembekal Cecair Teknologi Ldet ialah CAS tersuai China: 174501-65-6-1-Butyl-3-methylimidazolium tetrafluoroborate Cecair pembekal dan 1-Butyl-3-methylimid... Lihat Produk → Perkara yang Perlu Diperiksa pada Sijil Analisis
- Kandungan halida sisa, kerana halida boleh menjejaskan pemisahan pertukaran ion dan kakisan.
- Kandungan air, kerana air mengubah kepekatan berkesan bahan tambahan.
- Spektrum UV atau pemotongan UV, supaya anda boleh meramalkan penyerapan latar belakang.
- Konsistensi lot-to-lot, kerana lot baharu tidak seharusnya mengubah kaedah anda secara senyap.
Jika anda memerlukan bantuan memadankan bahan dengan kaedah, anda boleh bincangkan data ketulenan dan keperluan tersuai dengan pasukan teknikal kami .
Rawat Air sebagai Sebahagian daripada Kaedah
Ketulenan air dalam HPLC bukanlah persediaan sekali sahaja. Ia adalah pembolehubah harian yang boleh berubah mengikut musim, botol penyimpanan, dan keadaan sistem penulenan. Gunakan air Jenis 1, sahkan TOC dan kerintangan, kendalikannya dengan betul, dan pilih bahan tambahan dengan kebolehkesanan. Dalam kaedah yang dibina pada nanogram analit, air bukanlah "sekadar air."
